采用激光共聚焦显微镜研究了外源钙调素及其抗血清对‘丰水’梨自花(不亲和)和异花(亲和)授粉后花柱自发荧光变化的影响。结果表明:授粉12 h后,CaM处理后异花授粉花柱荧光值与未处理异花授粉花柱荧光值相比,花柱上部荧光值降低下部升高;而CaM处理后自花授粉花柱自发荧光值除距柱头2 500~3 000 μm外其余部分均高于未处理自花授粉花柱;CaM抗血清处理后异花授粉花柱荧光值除距柱头1 000~2 000 μm外其余部分均高于未处理异花授粉花柱;CaM抗血清处理自花授粉花柱自发荧光与未处理自花授粉花柱相比,分布规律发生改变,最高值位于距柱头1 000~1 500 μm处。授粉72 h后CaM处理后异花授粉花柱荧光值高于未处理异花授粉花柱,最高值位于子房端;CaM处理后自花授粉与未处理自花授粉花柱自发荧光值相比,分布规律发生改变,最高值位于距柱头1 500~2 000 μm处;CaM抗血清处理后异花及自花授粉花柱自发荧光与未处理异花及自花授粉花柱相比较分布规律均发生了改变,最高值都位于0~500 μm处。证实了外源CaM及其抗血清对自花、异花授粉的生理代谢过程均有影响。
在以往研究苹果锈果类病毒ASSVd的基础上,以通过斑点杂交检测ASSVd为阳性的杏树为试验材料,利用RT-PCR技术扩增出苹果锈果类病毒全长特异片段,通过回收克隆测序,发现杏树苹果锈果类病毒基因组长为330nt,将克隆测序结果在GenBank中登录,获得10条序列,登录号为:EU031487-EU031496。在此基础上,利用原位RT-PCR检测技术,进一步证明杏树叶片中有苹果锈果类病毒存在,主要分布在细胞核中。该研究证实苹果锈果类病毒也能侵染杏树,丰富了苹果锈果类病毒的寄主。
用PCR法扩增位于柑橘溃疡病菌致病基因pthA C-末端的3个核定位信号序列,并将其克隆到原核表达载体PET32a(+)上,经双酶切及核酸序列测定重组质粒(PthA-NLS),其序列与GenBank中pthA的相关序列有99.9%的同一性。重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)后诱导了重组多肽的表达,并用Ni2+-NTA纯化柱得到了48kD的纯化重组多肽。把重组多肽注入免疫Balb/c小白鼠,制备了相应的抗血清,Western Blotting和ELISA分析结果表明,抗血清可特异地结合重组多肽,亦可识别溃疡病菌PthA天然蛋白,获得的抗血清可以用于柑橘溃疡病的检测。利用抗血清与溃疡病菌混合接种离体冰糖橙叶片,发现抗血清能推迟溃疡病菌的致病过程,且病斑比对照小,但未能达到抗病的程度。pthA基因末端核定位信号序列的克隆、原核表达及抗血清的制备为进一步研究pthA的致病机理和研发溃疡病快速分子检测技术奠定了基础。
通过不同硅(Si)处理和接种炭疽病菌研究Si对菜薹肌醇磷脂信号系统和钙调素信号系统的影响。结果表明:Si对磷脂酰肌醇(PI)和磷脂酰肌醇-4-磷酸(PIP)的形成有明显的调节作用。感染炭疽病后,不同基因型的PI消长明显不同,适宜Si水平下感病后可诱导形成较高水平的PI。感染炭疽病菌后感病品种的中Si处理和抗病品种的低Si、中Si处理的PI呈明显增长趋势,而其它处理有消有长。感病品种在感病前期有抑制PIP产生的趋势,而后期转为促进作用,但抗病品种的变化规律与感病品种相反。在适宜Si水平下感染炭疽病菌后可明显提高抗、感病品种PIP含量,特别是在感病后期其诱导作用更明显,这可能与PI后期大量降解,传递抗病信息有关。Si影响钙调素(CaM)含量,其影响程度与炭疽病菌的作用有关。低Si水平明显促进了炭疽病菌对感病品种CaM的诱导作用,以中Si水平对抗病品种的诱导促进作用相对较强,而且感病品种的诱导促进作用比抗病品种明显。感病品种的中Si处理与抗病品种的低Si处理在感病后的CaM变化相对缓和。表明CaM参与炭疽病致病过程的调控。
通过制作石蜡切片研究了菜薹(Brassica campestris L. ssp. chinensis (L.) Makino var. utilis Tsen et Lee)
早熟品种‘油青49’和晚熟品种‘油青甜菜心80天’的花芽分化过程,结果表明,当展开2~3片真叶时花芽分化开始启动。用已报道的拟南芥Flowering locus C (FLC) 基因和FRIGIDA (FRI) 基因的保守区域设计引物,通过RT-PCR的方法从两个菜薹品种中均克隆得到了两个决定开花的关键基因,并命名为BrcuFLC (GenBank登录号为EF138603)和BrcuFRI (GenBank登录号为EU700362)。半定量式RT-PCR表达分析表明, BrcuFLC基因在早、晚熟菜薹品种的不同发育时期表达存在差异,表达量随真叶数增加而逐步减少,但在晚熟品种中BrcuFLC表达量降低幅度小;BrcuFRI则在早、晚熟品种的所有阶段表达都较低。BrcuFLC在菜薹不同部位表达的情况不同,在茎、叶中的表达强,花次之,根中表达较弱;而BrcuFRI在早、晚熟品种根中的表达量明显高于其它3个部位。
以3个品种芜菁的带柄子叶和胚轴为外植体,采用苯基噻二唑基脲(thidiazuron,TDZ)配合NAA以及BA配合NAA两种组合研究了适于芜菁离体再生的外植体类型和激素组合。发现带柄子叶为外植体,TDZ 7.0 mg·L-1 + NAA 1.0 mg·L-1的组合对不定芽分化最为有利。以此离体再生体系为基础,针对AgNO3浓度、苗龄、2,4-D预培养时间3个因素进行优化,得到了芜菁高频率离体再生体系。结果表明:采用5 d苗龄的带柄子叶作为外植体,在含有2,4-D 1.0 mg·L-1的MS培养基上预培养2 d,添加TDZ 7.0 mg·L-1 + NAA 1.0 mg·L-1 + AgNO3 5.0 mg·L-1的MS培养基为分化培养基对芜菁离体再生最为有利。依品种不同,最高分化率可以达到90%左右。分化后得到的不定芽在IBA 0.1 mg·L-1的MS培养基上可以100%生根,移植成活率达95%。
采用大蒜幼苗根系生长抑制率生物检测法,研究了该病菌在不同培养基、培养时间、培养温度、培养液pH、光照和振荡培养等条件下粗毒素的活性和产量,结果表明:大蒜白腐病病菌的最佳产毒培养基为Fries液体培养基,培养温度为18.0 ℃,培养基pH值为5.0,在黑暗条件下连续振荡培养6 d时产生的粗毒素的毒性最强。
我国首次发现并鉴定芍药牡丹远缘杂交种的过程及方法,并将该杂种命名为‘和谐’。通过对牡丹、芍药栽培品种及杂交种‘和谐’的观察、研究发现:‘和谐’的形态兼具有芍药与牡丹且多趋于芍药的特征,从DNA水平上检测到了与牡丹、芍药共有的特征条带。从形态学和分子生物学两方面证明了‘和谐’为芍药和牡丹远缘杂交形成的宿根类植物。
利用英国皇家园艺学会比色卡(RHSCC)和分光色差仪测定法将36份观赏向日葵的花色分为两大类,即黄色系和红色系。红色系向日葵的花色变异较小;黄色系向日葵的花色变异较大。黄色系向日葵又可分为柠檬黄色和橙黄色两个亚类。高效液相色谱法(HPLC)的分析结果表明,试验材料中含有的花青苷共有9种,但这9种花青苷中只有其中的一种在所有样品中均能检测到。对红色向日葵花瓣的花青苷提取液进行多级质谱分析发现,花青苷元类型主要是矢车菊素,其糖苷类型主要是和葡萄糖、鼠李糖和/或阿拉伯糖结合的配糖体;而在纯黄色的向日葵中未检测到这些花青苷,说明矢车菊类花青苷是红色向日葵舌状花显现红色的化学基础。
以牡丹品种‘洛阳红’(Paeonia suffruticosa 'Luoyang Hong')花瓣为材料,用CTAB法提取总RNA,根据已报道的ACC氧化酶(1-aminocyclopropane-1-carboxylic acid oxidase,ACO)保守氨基酸序列设计简并引物,通过RT-PCR扩增得到1条821 bp的牡丹ACO基因同源片段。利用该已知中间序列,通过快速扩增cDNA末端技术(Race)及序列拼接,最终得到该基因cDNA全长序列,命名为Ps-ACO1,GenBank登录号为DQ337251。分析结果表明,Ps-ACO1 cDNA全长1 221 bp,包含一个939 bp的开放读码框,5'非翻译区长65 bp,3'非翻译区长117 bp,编码产物为含有312个氨基酸残基的蛋白质。氨基酸序列与烟草、苹果、桃等植物的ACO同源性都达80%以上。
在研究西藏雅鲁藏布江中下游河谷流域与昌都地区横断山脉北段的三江(怒江、澜沧江、金沙江)河谷流域等西藏果树主产区的果业现状、市场背景、气候资源、果树种质资源基础上,针对性地提出西藏特色果业的发展思路,及以服务藏区旅游为主的市场目标,提出西藏果业可持续发展规划设想,并探讨产业发展对策。
‘文椰3号’椰子新品种是采用混系连续选择与定向跟踪筛选的方法从‘马来亚红矮’品种中选育的嫩果型椰子新品种。植株矮、投产早、结果多,果皮红色鲜艳,椰肉细腻松软,椰水鲜美清甜,适宜作为鲜果食用。种植后3~4年开花结果,结果高,平均株产105个,高产的可达200多个。
‘豫新58’是采用游离小孢子培养双单倍体育种技术育成的大白菜一代杂种。该品种早熟,生育期58-60 d。高抗病毒病和软腐病,抗霜霉病和黑斑病;净菜产量67.5 t·hm-2;叶球矮桩叠包,球形指数1.48。单球质量1.5~2.0 kg。叶质柔嫩,口感略甜,风味佳,生食、熟食皆宜。
蝴蝶兰‘红霞’由‘明和公主’自交选育而成。属中花多花型紫红线条花品种,花葶高50.9 cm,花葶平均分枝数1.7个,最多时可达4个分枝。主枝花朵数10朵;总花朵数19朵,多可达25朵以上。花朵圆整,花径8.3 cm。花瓣颜色较萼片深红。早花,花芽分化对低温要求不严格。