以‘嘎拉’苹果为材料,克隆了6–磷酸葡萄糖酸脱氢酶基因Md6PGDH1(序列号:MDP0000279299)全长。序列分析显示,该基因包含一个长为1 047 bp完整的开放阅读框,编码347个氨基酸,分子量为36.430 kD,预测等电点为9.24。同源性分析表明Md6PGDH1还有另外3个同源基因;功能域分析表明Md6PGDH蛋白含有两个保守的绑定域;亚细胞预测表明Md6PGDH定位存在差异。分析Md6PGDH1启动子发现存在多个响应非生物胁迫的顺式作用元件。定量分析显示,Md6PGDH1在苹果的不同组织中都有表达,且受非生物胁迫诱导。原核诱导Md6PGDH1蛋白并进行蛋白酶活的测定,为后续蛋白功能鉴定奠定了基础。Md6PGDH1在苹果愈伤组织中过量表达,提高其抗盐胁迫的能力。
以平邑甜茶幼苗(Malus hupehensis Rehd.)为试材,在盆栽条件下研究了连作土壤浇灌微酸性(pH 6.0)电解水对土壤环境和平邑甜茶幼苗生长的影响。结果表明,连作土壤中浇入微酸性电解水能够显著提高平邑甜茶幼苗的生物量,与连作土对照相比,幼苗根长度、根表面积、根体积和根系呼吸耗氧速率分别提高了47.03%、141.79%、101.31%和37.31%,连作土壤中真菌数量降幅达48.1%,细菌/真菌比值增加120%;应用T-RFLP技术分析了连作土壤真菌的群落结构,并采用多样性指数分析、聚类分析和主成分分析,发现微酸性电解水处理的土壤真菌群落具有最高的丰富度指数、多样性指数、均匀度指数和最低的优势度指数,而连作土壤的真菌群落具有最高的优势度指数和最低的丰富度指数、多样性指数、均匀度指数。微酸性电解水处理后,土壤真菌构成一个独立的群落结构,这些群落能够适应电解水处理后的土壤环境并成为环境的优势群落。微酸性电解水可减轻苹果连作障碍。
对“国家果树种质兴城梨、苹果圃”内保存的梨13个种625份资源的花器官11个表型性状进行数据采集,分析了花表型性状的分布频率、变异系数、Simpson指数和Shannon-weaver指数,并对每花序花朵数、雄蕊数、柱头数、花冠直径在5个栽培种的种群内和种群间多样性进行了比较分析,对脆肉和软肉梨进行了聚类分析。结果表明:(1)梨花器官表型多样性丰富,以白色花蕾、紫红色花药、柱头高于花药和花柱基部无茸毛等类型居多,分别占相对应描述符分布频率的50.56%、47.52%、63.20%和80.96%。(2)花药颜色的Simpson指数和Shannon-weaver指数较高,分别为0.719和2.351,多样性最为丰富,并新发现深红色和深紫色花药两种类型资源。(3)每花序花朵数、雄蕊数、花冠直径和柱头数的平均变异系数分别为19.50%、15.12%、13.74%和8.50%,表明柱头数性状的遗传稳定性高于另外3个性状。(4)根据花冠直径分布统计分析,提出了5级数值分级指标与参照品种。(5)梨花4个表型性状在种群内和种群间差异均达到极显著水平,种群内和种群间表型分化系数VST分别为72.97%和27.03%,表明种群内变异更为丰富。(6)聚类分析显示,196个脆肉梨地方品种可划分为5类,72个软肉型秋子梨可划分为4类。
为了探索SUMO E3连接酶(SIZ1)基因与桃(Prunus persica L. Batsch)果实采后低温贮藏期间冷害发生的关系,对桃基因组中的SIZ1基因进行生物信息学分析,同时采用qRT-PCR分析该基因在‘湖景蜜露’桃果实低温贮藏以及外源褪黑素减轻冷害进程中的表达特征。结果表明,PpSIZ1开放阅读框全长2 637 bp,编码878个氨基酸组成的蛋白质多肽。进化树分析发现,PpSIZ1与梅PmSIZ1的同源性最高,含有与拟南芥AtSIZ1相似的SAP、PHD、PINIT、SP-RING和SXS保守结构域,属于SUMO E3连接酶家族。qRT-PCR分析表明,低温(0 ℃)胁迫能诱导桃果实PpSIZ1表达水平的提高;100和200 μmol · L-1褪黑素处理能显著减轻桃果实低温贮藏期间冷害的发生,其中100 μmol · L-1褪黑素处理抑制冷害的效果最好,这种效果可能与PpSIZ1介导的SUMO化有关。
为探明杧果种质资源的香气特点,以28份杧果品种资源成熟果实为试材,采用顶空固相微萃取技术和气相色谱质谱联用仪测定了果实香气的组成和相对含量。结果表明,不同杧果品种果实香气组成和含量均存在很大差异,从28个品种中分离出63种香气成分;根据不同类别香气成分的积累量,杧果品种资源可以分为萜烯类、酯类和醛类;24个品种香气成分以单萜烯类和倍半萜烯类为主,3–蒈烯、萜品油烯和α–荜澄茄油烯是含量最高的萜烯类成分;‘Lippens’、‘桂香杧’和‘鹦鹉杧’果肉中积累量最高的香气物质均为酯类,丁酸丁酯、丁酸异戊酯和异戊酸乙酯分别是这3个品种主要的香气成分;‘丰顺无核’果肉中香气成分含量最高的是6–溴吲哚–3–甲醛,相对含量为33.64%。
单向不亲和对于研究种间花粉不亲和及自交不亲和机制有重要意义。以潘那利番茄‘LA0716’渐渗系群体中的单向不亲和株系为主要材料,通过花粉萌发试验,正、反交试验和花粉管在雌蕊中的伸长研究,发现单向不亲和株系的花粉活力正常,其花粉与普通栽培番茄杂交可正常结实,但是其雌蕊不能接受自身或栽培番茄的花粉。然而,将秘鲁番茄‘LA3858’的花粉授予单向不亲和株系,花粉能够正常萌发,花粉管正常伸长和受精,但是杂交种子败育。利用20个分子标记对BC5S3群体的1 000株植株进行遗传分析,结合表型鉴定结果,将单向不亲和基因UI3a精细定位于第3号染色体上分子标记C2_At3g10220和1k-1294之间,物理距离为349 kb,该区域编码37个基因。
Mi-1.2基因编码CC-NBS-LRR家族抗病蛋白,对线虫及刺吸式昆虫具有广谱抗性。以番茄木虱和携带Mi-1.2基因的番茄品系‘Motelle’作为研究体系,研究番茄木虱取食对番茄叶片抗氧化酶活性及防御反应相关基因表达的影响。结果表明:番茄木虱的取食显著提高了番茄叶片抗氧化酶POD、CAT、APX等的活性,同时诱导Mi-1.2基因表达;番茄木虱的取食上调SA合成有关基因PAL、SA信号途径标志基因PR-1(P4)及与Mi-1.2功能相关基因WRKY70、WRKY72a、WRKY72b的表达。JA/systemin信号途径和伤害有关的PinII、TPI-1、PR-6、PR-7、PR-5等及Prosystemin编码基因Psy的表达未发生变化;JA合成途径相关酶编码基因AOS2、LoxD下调表达,AOC的表达没有变化。SA信号途径可能参与Mi-1.2介导的番茄对于刺吸式昆虫番茄木虱的防御反应。另外,Mi-1.2的RNAi沉默不会改变上述基因的mRNA水平,说明Mi-1.2基因产物对这些基因的表达无调控作用。
以抗青枯病茄子自交系‘E-31’为材料,利用病毒诱导的基因沉默(virus induced gene silencing,VIGS)技术沉默抗病材料中调控抗病相关的信号基因,研究其在茄子抗青枯病反应中的作用。qRT-PCR结果表明,与对照植株相比,VIGS诱导基因沉默植株,目的基因的表达量均下降。MAPK级联途径相关基因MKK2和MAPK6,SA途径中的信号基因PAD4、NPR1、SGT1、TGA和GluA,以及WRRY转录因子基因WRKY70沉默,接种青枯雷尔氏菌(Ralstonia solanacearum)后植株出现不同程度的枯萎,而对照植株无变化。MAPK级联途径相关基因MAPK3和MAPK4,SA途径中的信号基因NDR1,ET途径中的信号基因EIN2和EIL1,JA途径信号基因JAR1沉默后,植株均未出现萎蔫症状。研究结果表明,MKK2、MAPK6、PAD4、NPR1、SGT1、TGA、GluA和WRKY70等基因在茄子调控抗青枯病反应中起正调控作用,而MAPK3、MAPK4、NDR1、EIL1、EIN2和JAR1等基因可能未参与或起负调作用,推断茄子‘E-31’调控青枯病信号途径可能主要依赖于SA途径。
由菜豆金色花叶病毒属病毒引起的番茄曲叶病严重制约着世界范围内番茄的生产。自然条件下复合侵染引起的重组或假重组可能产生新株系、新种或新的病害复合体,导致致病性增强或减弱。从云南红河地区表现叶片黄化并伴随植株矮化的一株番茄中,获得了Y3080-32和Y3080-40两个菜豆金色花叶病毒属病毒分离物以及Y3080-1和Y3080-2两个beta卫星分离物。序列比对表明,Y3080-32属于红河赛葵黄脉病毒(MaYVHoV)分离物,Y3080-40属于云南辣椒曲叶病毒(PepLCYnV)分离物。重组分析显示,分离物Y3080-32是重组病毒,由MaYVHoV和PepLCYnV(Y3080-40)重组产生。Y3080-1和Y3080-2是赛葵黄脉beta卫星(MaYVB)分离物。MaYVHoV/MaYVB复合体和PepLCYnV复合侵染番茄,表明菜豆金色花叶病毒属病毒的复合侵染为重组和假重组的发生提供了机会。
以中国南瓜(Cucurbita moschata)为试验材料,利用同源克隆和南瓜转录组unigene序列获得2个IMP基因的全长cDNA序列,将两个基因命名为CmIMP1和CmIMP2,GenBank登录号为KP735607和KP735608。CmIMP1基因cDNA全长1 053 bp,包含1个810 bp的ORF,共编码269个氨基酸;CmIMP2基因cDNA全长945 bp,包含1个807 bp的ORF,共编码268个氨基酸。序列分析发现两个基因均含有磷酸酶家族锂敏感的3个特殊结构域,系统进化树分析表明这2个南瓜CmIMP与其他植物IMP有较高同源性(63.8% ~ 94.0%),并与葫芦科作物最接近。采用荧光定量PCR研究CmIMP在各组织及逆境条件下的表达模式显示,其表达具有组织特异性,在叶中表达最高,须和幼果次之;盐胁迫和干旱胁迫可强烈诱导CmIMP表达,ABA对CmIMP的诱导较微弱,推测CmIMP在南瓜响应非生物胁迫的分子调控机制方面发挥重要作用。
通过变异系数和聚类分析对黑心金光菊(Rudbeckia hirta L.)花部形态变异进行多样性分析,结果表明:(1)黑心金光菊花部形态性状具有较大程度的变异,其中舌状小花内侧颜色数、花序直径、舌状小花类型数、花心直径、舌状小花长、舌状小花宽、舌状小花长宽比、头状花序类型、舌状小花类型、舌状小花基部朝向(单瓣)、舌状小花边缘卷曲、舌状小花纵向姿态、内侧主要颜色、外侧与内侧颜色比较、分布位置、分布形式等不同性状在不同材料之间表现出了不同程度的多样性,而仅有舌状小花数、舌状小花内轮纵向姿态和次要颜色的变异系数较低。舌状小花龙骨数、舌状小花上表面质地、舌状小花花瓣最宽处横切面形状、舌状小花顶端形状无变异;(2)花部形态变异分析和R聚类分析均表明选取的性状之间变异的相对独立性;(3)通过Q聚类分析将所选变异植株分为A、B、C、D等4类。
调查了云南地区3个野生杏黄兜兰(Paphiopedilum armeniacum)居群,进行叶片和花器官等19个性状的表型多样性分析,采用巢式方差、变异系数、主成分分析等方法,讨论杏黄兜兰居群间和居群内的表型多样性。结果显示:杏黄兜兰在居群内和居群间均存在丰富的表型性状变异,居群间有花瓣长、子房长等13个性状表现极显著或显著差异,居群内有植株冠幅、合萼片宽等10个性状差异极显著或显著;杏黄兜兰平均表型分化系数为53.02%,处于中等水平,居群间的表型分化略大于居群内的表型分化;19个表型性状变异系数平均值的变化范围为9.68% ~ 26.36%,3个居群表型性状变异系数平均值分别为13.27%、15.85%和14.96%,变异系数在居群间差异不显著,在表型性状间差异极显著;主成分分析表明,对植株表型差异贡献率最大的是株高和花茎高;Pearson相关分析表明,杏黄兜兰花被片相关性状之间呈显著或极显著正相关,株高和花茎高与植株的其他性状均显著正相关,尤其与指示花器官大小的性状极显著正相关。
以‘龙井43’茶树叶片的cDNA为模板,利用RT?PCR技术克隆了茶树亚硝酸还原酶基因(CsNiR),得到完整的ORF全长为1 764 bp,编码587个氨基酸;所推导的氨基酸序列与垂枝桦(Betula pendula)、拟南芥(Arabidopsis thaliana)、菠菜(Spinacia oleracea)和水稻(Oryza sativa)的同源性均大于76%。生物信息学分析表明,CsNiR分子量为68.648 kD,等电点为6.12,为亲水性的非分泌蛋白;二级结构的预测显示,CsNiR具有完整的NiR 蛋白结构,含血红素蛋白β–化合物区域和4Fe-4S区域。实时荧光定量结果表明,该基因在成熟叶片中表达量高于一芽二叶和根。采用营养液水培3个茶树品种,在氮饥饿两周后分别供应正常氮素和低氮素(1和0.1 mmol · L-1 NH4NO3),qRT-PCR测定发现,正常氮素处理的2 h和6 h,诱导根CsNiR表达量显著增加,叶片中的表达量变化延迟到24 h之后,且变化幅度存在基因型之间的差异;低氮处理对CsNiR表达量的影响相对较小。因此,研究CsNiR基因的表达特性及其在茶树氮素利用中所发挥的作用,需结合茶树基因型、组织部位、供氮水平等进行综合评价。
应用扫描电镜观察了湖南省47份柚类和5份其他柑橘类的花粉形态,统计了花粉表型性状,结果表明其花粉形态具有十分丰富的多样性。花粉大小和形状差异很大,最大花粉的体积(极轴长 × 赤道轴长)是最小的2.04倍,大部分材料的花粉为椭球形。除道县野橘花粉表面沟壑满布,无明显网眼和网脊外,其他材料的花粉均呈网状分布,网眼近圆形,大小不一,不同材料的网眼大小和分布密度存在较大差异。除山下红温州蜜柑的花粉多为瘪粒,不易观察外,其他材料的花粉大部分具有4条萌发沟,少数有5条萌发沟,萌发沟沿极轴方向以等距环状分布,沟长直达两极。花粉为长椭球形的材料多为酸柚、酸橙或柠檬等酸度较高的类型,其网眼较大,网脊较宽,萌发孔多嵌在萌发沟内,不太明显;反之亦然。按照花粉表型性状对52份材料进行了聚类分析,在遗传距离1.2处大致分为5个组群。讨论了花粉形态对于湖南省地方柚类分类和遗传多样性研究的参考价值。
2011—2014年研究了5个中间砧对‘黄金梨’(Pyrus pyrifolia Nakai)的新梢生长量、单株产量、单果质量以及叶片中矿质元素积累的影响。试验所用的中间砧分别为‘K11’(P. communis × P. pyrifolia)、‘中矮1号’(P. ussuriensis Maxim × P. communis)、‘OHF51’(P. communis L.)、‘OHF97’(P. communis L.)和‘FBA’(P. communis L.),基砧为豆梨(P. calleryana Decne),接穗为‘黄金梨’。从嫁接复合体主干生长一致性看,以‘K11’和‘中矮1号’与基砧和接穗的亲和性较好。嫁接后第1年开花,以‘OHF51’为中间砧的‘黄金梨’花量最多,但2年后的产量和单果质量以‘OHF97’和‘中矮1号’作中间砧的较高。不同中间砧上的接穗新梢生长动态虽然相似,但是嫁接在‘K11’中间砧上的新梢生长量明显高于其他4个中间砧。生长期,嫁接在‘K11’上的接穗叶片氮、磷、钙、镁含量高于其他中间砧,‘OHF51’上锰含量最高,‘OHF97’上锌含量略高。生长后期,‘中矮1号’上的叶片氮、磷含量略高。综合分析认为,‘中矮1号’为中间砧的嫁接组合优于其他4个砧穗组合。
以‘贵农5号’刺梨(Rosa roxburghii Tratt)为材料,采用离体浸泡处理的方法研究了外源Ca2+和Cu2+两种金属离子对刺梨果实抗坏血酸(AsA)含量及其相关代谢基因表达的影响。结果表明:Ca2+对刺梨果实中AsA的积累有促进作用,而Cu2+则引起AsA含量明显降低。实时荧光定量PCR分析表明,添加Ca2+对L–半乳糖途径中的基因GalLDH和GPP以及再生途径中的基因DHAR和MDHAR的表达有显著的上调作用,说明Ca2+参与了刺梨果实AsA合成和代谢相关基因转录水平的调控;而外源Cu2+除对AsA合成途径的GalLDH和GGP两个基因表现出较小幅度的下调作用外,对分解代谢过程的基因并未有明显的上调效应,意味着Cu2+并不是主要在基因转录水平促进AsA的氧化。
为了探讨赤霉素(GA)对黄瓜在根区亚低温下氮(N)吸收和代谢的影响机理,以营养液栽培的‘中农26’黄瓜为试材,研究了外源GA对黄瓜在根区亚低温下叶片叶绿素荧光参数、光合参数和碳(C)、氮代谢平衡调节酶活性的影响。结果表明:与根区适温处理相比,根区亚低温使黄瓜幼苗生长受抑,叶片光系统Ⅱ(PSⅡ)的光化学活性、光合放氧速率、净光合速率(Pn)、磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPCase)和蔗糖磷酸合成酶(SPS)活性等降低,单株C与N积累量的比值(C/N)升高,N代谢消耗的能量减少。外源GA处理缓解了根区亚低温对黄瓜生长的抑制,使PSⅡ光化学活性、光合放氧速率、Pn、PEPCase和SPS活性都有不同程度的提高,C/N值和N代谢消耗的能量恢复至与根区适温处理相当的水平。表明,外源GA可以通过增强光能捕获和CO2同化能力,调节N、C代谢平衡,促进根区亚低温下黄瓜对N的吸收与代谢。
建立超高效液相色谱快速测定丝瓜中酚类物质组分及其含量的方法,为丝瓜酶促褐变的后续研究提供技术支持。液相色谱柱为ACQUITY UPLC BEH C18(2.1 mm × 100 mm,1.7 μm),流动相为甲醇(A)/ 0.3%乙酸水溶液(B),柱温32 ℃,进样量2 μL,流速为0.25 mL · min-1。采用梯度洗脱,洗脱程序0 ~ 0.5 min,95% B;0.5 ~ 17.5 min,95% ~ 67.5% B;17.5 ~ 18 min,67.5% ~ 95% B。检测波长选取283 nm。14种酚类化合物标准品在18 min内完全分离,样品中检测出13种酚酸。线性范围在0.05 ~ 4 mg · L -1,检出限(S/N = 3)为0.004 ~ 0.049 mg · L-1,决定系数均大于0.999,精密度、重复性、稳定性相对标准偏差均小于5%。平均回收率在95.70% ~ 106.89%,相对标准偏差在0.32% ~ 4.71%。龙胆酸为丝瓜样品中主要酚酸,其次是绿原酸、多巴胺、L–酪氨酸,再次是焦性没食子酸、原儿茶酸、香草酸、儿茶酚、表儿茶酸、对羟基苯甲酸、丁香酸、4–甲基儿茶酚、对香豆酸。
以红掌栽培品种‘Dakota’为材料,采用RACE技术克隆获得AnCHI基因的cDNA序列,分析花青素含量与该基因表达的关系,进一步完善红掌花青素合成途径。结果表明:AnCHI序列全长为1 117 bp,其中开放阅读框为777 bp,编码258个氨基酸;AnCHI在不同时期红掌佛焰苞以及根、茎、叶、肉穗组织中均有表达,且在佛焰苞发育前期表达量明显高于后期,测得花青素含量与基因表达量变化基本一致;构建的pGEX-4T1-AnCHI重组表达载体在原核中正确表达。初步验证了AnCHI的表达可能对红掌佛焰苞花青素的合成有一定促进作用。
柃木属(Eurya Thunb.)植物为严格的雌雄异株植物,性别变异现象极为少见。但作者野外调查发现,钝叶柃(Eurya obtusifolia H. T. Chang)存在显著的性别变异现象。以钝叶柃雌株、雄株和两性株花发育过程中关键时期的叶片为材料,采用高效液相色谱法对生长素(IAA)、赤霉素(GA3)、玉米素核苷(ZR)和脱落酸(ABA)的含量进行测定和比值比较,并分析其动态变化规律。结果表明:在钝叶柃3种性别植株花发育过程中,叶片中GA3和ZR含量增加有利于雄花和两性花的发育,高水平IAA有明显的促雌效应,ABA对性别分化的影响还不确定。在激素平衡中,ABA/ZR、IAA/ZR、GA3/ZR比值的增加对雌花的发育有促进作用,而较高的ABA/IAA、GA3/IAA比值更有助于雄花的发育。
‘中矮红梨’是以‘矮香’为母本,‘贺新村’为父本杂交选育而成的矮化红色梨新品种。树势中庸,树冠矮小,枝条自然开张。果实近圆形;阳面着紫红色;后熟后果肉柔软多汁,风味酸甜适口,可溶性固形物含量15.38%,可滴定酸含量0.35%,维生素C含量0.0145 mg · g-1;有芳香味,品质极佳。高抗梨黑星病,较抗梨干腐病,抗寒性较强。
‘甘科10号’辣椒是以自交系‘P828’为母本,‘P909’为父本组配的杂交一代新品种。早熟,果实绿色,粗长羊角形,轻度螺旋,果基部皱褶较多。果长30.0 cm,果肩宽4.3 cm,果肉厚0.35 cm,平均单果质量87 g。辣味淡,纤维细,品质优良。产量高,商品性好,耐辣椒疫病,适宜中国北方保护地栽培。
‘徽乌11’是以乌塌菜雄性不育系‘Wb11-18’为母本,‘W07-8’为父本杂交育成的一代雄性不育杂种。生长势旺盛,耐寒性较好,冬性较强。株高13 ~ 14 cm,开展度28 cm × 28 cm,株形紧凑,包心紧实。叶片微皱,黄绿色,叶片数27片,叶柄白色,质嫩。单株质量0.3 kg,平均产量49 500 kg · hm-2。田间综合表现优良,适宜在长江、淮河流域露地种植。
‘汉源葡萄青椒’是从四川省汉源县境内优良地方资源中选育出的抗寒青花椒新品种。植株具有较强的抵抗高海拔冬季低温的能力。果穗形状如葡萄串,长9.8 cm,穗粒数73个。干果皮千粒质量18.91 g,挥发油7.59%,麻味持久,香气浓郁。盛果期树冠投影面积鲜椒产量达1.325 kg · m-2,早期结实和丰产性能好。适宜于干热干旱和湿热多雨的山地、丘陵和平原地区栽种。