抑制性消减杂交分离苹果缺铁诱导的相关基因

园艺学报 ›› 2007, Vol. 34 ›› Issue (3): 555-560.

抑制性消减杂交分离苹果缺铁诱导的相关基因

张玉刚^1,2;许雪峰¹;李天忠¹;王　忆¹;孔　瑾¹; 韩振海^1*

(¹ 中国农业大学园艺植物研究所, 北京100094; ² 青岛农业大学园艺学院, 山东青岛266109)

收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2007-06-25 发布日期:2007-06-25

Isolation of FeDeficiency-induced Genes by Suppression Subtractive Hybridiza tion in Malus xiaojinensis

ZHANG Yu-gang^1,2;XU Xue-feng¹;LI Tian-zhong¹;WANG Yi¹;KONG Jin¹;HAN Zhen-hai^1*

(¹ Institute for Horticultural Plants, China Agricultural University, Beijing 100094, China; ²Horticultural College, QingdaoAgricultural University, Qingdao, Shandong 266109,China)

Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:2007-06-25 Published:2007-06-25

摘要/Abstract

摘要： 以铁高效基因型植物———苹果属小金海棠(Malus xiaojinensis Cheng et J iang) 为材料, 利用抑
制性消减杂交( SSH) 方法, 成功构建了小金海棠缺铁条件下的消减cDNA文库。该文库包含1 152个克
隆, 通过PCR检测插入片段大小在300～1 000 bp之间。对构建的消减cDNA文库进行差异筛选, 得到差异
表达片段( ESTs) 105个。GenBank上BLAST结果如下: 50个ESTs与其它物种同源性较高, 视为已知基
因, 并根据其功能分为9个组; 32个ESTs在GenBank中无法查到对应的同源序列, 可能代表了新基因;
另外23个是与已知ESTs重复的基因片段。

关键词: 苹果, 小金海棠, 抑制性消减杂交, cDNA文库, 差异筛选

Abstract: In order to isolate genes involved in Fe nutrition, supp ression subtractive hybridization ( SSH)
was performed using mixed cDNAs p repared from Malus xiaojinensis roots treated with Fe deficiency as tester
and treated with Fe sufficiency as drivers. A forward subtractive cDNA library was constructed, from which
1 152 recombinant colonieswere p icked and amp lified. Through differential screening of the subtractive cDNA
library, 105 exp ress sequence tags (ESTs) were identified as Fe deficiency stress induced. Of the 105 ESTs,
50 contain regionswith 60% - 90% identity to their homolog in GenBank, 32 are expected to be novel genes,
23 are repeated fragments to other genes. The ESTswith significant p rotein homologywere sorted into 9 func2
tional categories.

Key words: Apple, Malus xiaojinensis, Suppression subtractive hybridization ( SSH), cDNA library, Differential screen

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