马铃薯S病毒PVSO株系RT-LAMP检测方法的建立及应用

doi:10.16420/j.issn.0513-353x.2018-0164

园艺学报 ›› 2018, Vol. 45 ›› Issue (8): 1613-1620.doi: 10.16420/j.issn.0513-353x.2018-0164

马铃薯S病毒PVSO株系RT-LAMP检测方法的建立及应用

李华伟，许泳清，罗文彬，纪荣昌，刘中华，许国春，张鸿，李国良，林赵淼，邱永祥，邱思鑫，汤浩*

福建省农业科学院作物研究所，农业部南方薯类科学观测实验站，福州 350013

出版日期:2018-08-25 发布日期:2018-08-25
基金资助:
福建省公益类科研院所基本科研专项（2016R1025-8）；国家现代农业产业技术体系建设专项资金项目（CARS-10-ES09）；国家重点研发计划课题（2018YFD0200809）；福建省农业科学院创新团队项目（STIT2017-2-3）

Establishment of Loop-mediated Isothermal Amplification Assay for Detection of Potato virus S Ordinary Strain

LI Huawei，XU Yongqing，LUO Wenbin，JI Rongchang，LIU Zhonghua，XU Guochun，ZHANG Hong，LI Guoliang，LIN Zhaomiao，QIU Yongxiang，QIU Sixin，and TANG Hao*

Crop Research Institute，Fujian Academy of Agricultural Sciences，Scientific Observing and Experimental Station of Tuber and Root Crops in South China，Ministry of Agricultrue，P. R. China，Fuzhou 350013，China

Online:2018-08-25 Published:2018-08-25

摘要/Abstract

摘要：

为建立一种马铃薯S病毒普通株系PVSO快速、灵敏的RT-LAMP可视化检测方法。根据马铃薯S病毒普通株系的CP核苷酸序列设计4条引物，以感染PVS的马铃薯叶片总RNA为模板，采用一步法RT-LAMP，在62 ℃下反应60 min，扩增产物利用琼脂糖电泳分析和钙黄绿素染料显色判断结果，同时对其特异性和灵敏性进行测定。结果表明，建立的RT-LAMP方法可特异地对PVSO进行检测，检测灵敏度为RT-PCR的100倍。对33份马铃薯样品检测表明，RT-LAMP与RT-PCR方法检测结果基本一致。因此建立的PVSO的 RT-LAMP可视化检测方法简便，特异性强，灵敏度高，适合PVSO的快速检测。

关键词: 马铃薯, 马铃薯S病毒, 环介导等温扩增, 钙黄绿素

Abstract:

The object of this study is to develop a One-step reverse transcription loop-mediated isothermal amplification（RT-LAMP）assay for rapid and sensitive detection of Potato virus S ordinary strain（PVSO）. Four RT-LAMP primers were designed on the basis of the coat protein（CP）gene sequences of PVSO，and template RNA from infected leaves were used for One-step RT-LAMP which were carried out under isothermal conditions at 62 ℃ for 60 minutes. RT-LAMP products were analyzed by electrophoresis in agarose gels followed by staining with Calcein. Then the specificity and sensitivity of RT-LAMP were testified. A rapid and specific RT-LAMP method for detection of PVSO was established. Sensitivity of the RT-LAMP assay was 100-fold higher than ordinary RT-PCR method，and the testing results of 33 potato samples were basically consistent with RT-PCR. The RT-LAMP described in this study represents a sensitive，specific and rapid assay for the detection of PVSO.

Key words: potato, Potato virus S, LAMP, calcein

中图分类号:

S 641

李华伟，许泳清，罗文彬，纪荣昌，刘中华，许国春，张鸿，李国良，林赵淼，邱永祥，邱思鑫，汤浩*. 马铃薯S病毒PVSO株系RT-LAMP检测方法的建立及应用[J]. 园艺学报, 2018, 45(8): 1613-1620.

LI Huawei，XU Yongqing，LUO Wenbin，JI Rongchang，LIU Zhonghua，XU Guochun，ZHANG Hong，LI Guoliang，LIN Zhaomiao，QIU Yongxiang，QIU Sixin，and TANG Hao*. Establishment of Loop-mediated Isothermal Amplification Assay for Detection of Potato virus S Ordinary Strain[J]. ACTA HORTICULTURAE SINICA, 2018, 45(8): 1613-1620.

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