菠萝凋萎相关病毒–2实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立

园艺学报 ›› 2014, Vol. 41 ›› Issue (6): 1257-1266.

菠萝凋萎相关病毒–2实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立

胡加谊1,2，罗志文2，范鸿雁2，李向宏2，刘志昕3，何凡2,*

（1海南大学环境与植物保护学院，海口 570228；2海南省农业科学院热带果树研究所，农业部海口热带果树科学观测实验站，海口 571100；3中国热带农业科学院热带生物技术研究所，海口 571101）

收稿日期:2014-01-27 出版日期:2014-06-25 发布日期:2014-06-25

Development of a Real-time Fluorescent Quantitative RT-PCR Method for the Detection of Pineapple mealybug wilt associated virus-2

HU Jia-yi1,2，LUO Zhi-wen2，FAN Hong-yan2，LI Xiang-hong2，LIU Zhi-xin3，and HE Fan2,*

（1 College of Environment and Plant Protection，Hainan University，Haikou 570228，China；2 Institute of Tropical Fruit Trees，Hainan Academy of Agricultural Sciences/Haikou Investigation Station of Tropical Fruit Trees，Ministry of Agriculture，Haikou 571100，China；3Institute of Tropical Bioscience and Biotechnology，Chinese Academy of Tropical Agricultural Sciences，Haikou 571101，China）

Received:2014-01-27 Online:2014-06-25 Published:2014-06-25

摘要/Abstract

摘要： 菠萝凋萎相关病毒（Pineapple mealybug wilt associated virus-2，PMWaV-2）是引起的菠萝凋萎病（Mealybug wilt of pineapple，MWP）的重要病原。本研究中根据PMWaV-2外壳蛋白基因序列设计特异性引物和探针，建立基于TaqMan探针的实时荧光定量RT-PCR检测方法。该方法能高灵敏检测出阳性样品，对阴性样品及空白对照均无荧光反应；灵敏度比普通PCR高100倍；重复性试验表明批内和批间变异系数均在1.85%以内，表明本方法是一种操作简便、特异性强、灵敏度高、重复性较好的PMWaV-2定量检测方法。

关键词: 菠萝, 菠萝凋萎病毒–2（PMWaV-2）, TaqMan探针, 实时荧光定量RT-PCR, 检测

Abstract: Pineapple mealybug wilt associated virus-2（PMWaV-2）is an important pathogen that causes Mealybug wilt of pineapple（MWP）. This study established a real-time quantitative RT-PCR method with TaqMan probe based on specific primers of conserved nucleotide sequence of PMWaV-2 coat protein gene. The results showed that the method is highly sensitive to positive sample，but has no fluorescence signal to health sample and water control. The sensitivity of real-time quantitative RT-PCR is about 100 times higher than regular PCR. Three-time repeats revealed that the coefficients of variation between the intra- and inter-assay were both within 1.85%，indicating a simple，specificity，high sensitivity，and reliable reproducibility detection method to PMWaV-2.

Key words: pineapple, PMWaV-2, TaqMan probe, real-time quantitative RT-PCR, detction

中图分类号:

胡加谊罗志文范鸿雁李向宏刘志昕何凡. 菠萝凋萎相关病毒–2实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立[J]. 园艺学报, 2014, 41(6): 1257-1266.

HU Jia-yi1,2，LUO Zhi-wen2，FAN Hong-yan2，LI Xiang-hong2，LIU Zhi-xin3，and HE Fan2,*. Development of a Real-time Fluorescent Quantitative RT-PCR Method for the Detection of Pineapple mealybug wilt associated virus-2[J]. ACTA HORTICULTURAE SINICA, 2014, 41(6): 1257-1266.

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