琯溪蜜柚及其早熟红肉突变体成熟果实SSH 文库的构建及初步分析

园艺学报 ›› 2013, Vol. 40 ›› Issue (7): 1359-1368.

琯溪蜜柚及其早熟红肉突变体成熟果实SSH 文库的构建及初步分析

刘顺枝，黄忠，胡位荣，江月玲，王小兰^*

广州大学生命科学学院，广州 510006

收稿日期:2013-01-10 出版日期:2013-07-25 发布日期:2013-07-25
基金资助:
国家自然科学基金项目（30871761）；广东省科技计划项目（2010B020305014）；国家级大学生创新训练项目（201211078020）

Construction and Analysis of Suppression Subtractive Hybridization Library of Red-fleshed Sweet Pomelo

LIU Shun-zhi，HUANG Zhong，HU Wei-rong，JIANG Yue-ling，and WANG Xiao-lan^*

School of Life Sciences，Guangzhou University，Guangzhou 510006，China

Received:2013-01-10 Online:2013-07-25 Published:2013-07-25

摘要/Abstract

摘要： 分别以琯溪蜜柚及其突变体红肉蜜柚（成熟期早20 ~ 25 d）的成熟果肉cDNA 作驱赶子和检测子，利用结合分子镜像选择技术的SSH 技术，构建了红肉蜜柚和琯溪蜜柚的正向差减cDNA 文库。通过PCR 检测cDNA 克隆外源插入片段，其大小介于100 ~ 1 000 bp。通过点杂交差异筛选文库，得到102 个表达增强2 倍或以上的克隆并测序，结果表明这102 个克隆代表44 个Unigenes，通过序列同源性比对分析，发现获得的Unigenes 在功能上主要涉及信号传导、蛋白质合成、应激反应、转运等代谢反应。

关键词: 琯溪蜜柚, 突变体, 抑制差减杂交, 差异表达基因

Abstract: A forward subtractive cDNA library was constructed through suppression subtractive hybridization（SSH） method with mirror orientation selection，which was performed using the cDNA from wild type‘Guanxi’pomelo（Citrus grandis）as driver，those from its red-flesh mutant as tester. PCR analysis showed that most of the clones with insertions ranged from 100 bp to 1 000 bp. After differential screening through dot hybridization，a total of 102 transcripts represented 44 Unigenes with signal ratios stronger than two times were selected for 2 additional screenings. Homology analysis showed that they
were found to be involved in diverse biological processes，such as signal transduction，protein synthesis，stress response as well as transport metabolism.

Key words: words：Citrus grandis（L.）Osbeck, mutant strain, suppression subtractive hybridization（SSH）, differentially expressed sequence

中图分类号:

S 666

刘顺枝, 黄忠, 胡位荣, 江月玲, 王小兰. 琯溪蜜柚及其早熟红肉突变体成熟果实SSH 文库的构建及初步分析[J]. 园艺学报, 2013, 40(7): 1359-1368.

LIU Shun-Zhi, HUANG Zhong, HU Wei-Rong, JIANG Yue-Ling, WANG Xiao-Lan. Construction and Analysis of Suppression Subtractive Hybridization Library of Red-fleshed Sweet Pomelo[J]. ACTA HORTICULTURAE SINICA, 2013, 40(7): 1359-1368.

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