瓜类褪绿黄化病毒p22 基因在大肠杆菌中的表达及抗血清的制备

园艺学报 ›› 2013, Vol. 40 ›› Issue (4): 762-.

瓜类褪绿黄化病毒p22 基因在大肠杆菌中的表达及抗血清的制备

施艳, 王振跃, 袁媛, 刘珊珊, 孙虎, 古勤生

（1 河南农业大学植物保护学院，郑州 450002；2 河南省农业科学院植物保护所，郑州 450002；3 中国农业科学院郑
州果树所，郑州 450009）

出版日期:2013-04-25 发布日期:2013-04-25

Expression of p22 Gene of Cucurbit chlorotic yellows virus in Escherichia coli and Preparation of Antiserum

SHI Yan, WANG Zhen-Yue, YUAN Yuan, LIU Shan-Shan, SUN Hu, GU Qin-Sheng

（1College of Plant Protection，Henan Agricultural University，Zhengzhou 450002，China；2Plant Protection Institute，
Henan Academy of Agricultural Sciences，Zhengzhou 450002，China；3Zhengzhou Fruit Research Institute，Chinese
Academy of Agriculture Sciences，Zhengzhou 450009，China）

Online:2013-04-25 Published:2013-04-25

摘要/Abstract

摘要： 以被瓜类褪绿黄化病毒（Cucurbit chlorotic yellows virus，CCYV）侵染的甜瓜叶片为供试材
料，采用RT-PCR 方法克隆其P22 蛋白基因，并将其连接到原核表达载体pGex-4T-3 上，PCR 验证及克隆
测序确定开放阅读框的正确性。将重组载体pGexp22 转化大肠杆菌BL21 菌株，诱导表达，SDS-PAGE 分
析表明，经IPTG 诱导，p22 基因在大肠杆菌BL21 中得到了高效表达。以表达的蛋白作为抗原，免疫家
兔，制备了CCYV P22 的特异性抗血清。ACP-ELISA 检测结果表明，血清效价高达1.28 × 10⁵。Western blot
检测甜瓜叶片，结果表明抗血清能够特异性地检测CCYV 侵染的甜瓜叶片中的CCYV P22 蛋白。

关键词: 甜瓜, 瓜类褪绿黄化病毒, P22, 原核表达, 抗血清

Abstract: p22 gene was amplified by RT-PCR from CCYV infected melon leaves and cloned into the
prokaryotic expression vector pGex-4T-3. After verification by PCR and sequencing，the recombinant
plasmid was transformed to Escherichia coli strain BL21 for protein expression. The SDS-PAGE analyses
showed that 48 kD specific fusion protein was highly expressed after induction by IPTG. The expressed
protein was purified from SDS-PAGE and the antiserum against the protein was raised in rabbit. The titer
of antiserum was 1.28 × 10⁵estimated by ACP-ELISA. Western blot analysis confirmed that the antiserum
reacted specifically with P22 protein of CCYV.

Key words: melon, Cucurbit chlorotic yellows virus, P22, prokaryotic expression, antiserum

中图分类号:

S 652

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