园艺学报 ›› 2012, Vol. 39 ›› Issue (12): 2395-2403.
汤青林, 李念祖, 宋明, 丁宁, 陈竹睿, 刘智宇, 王志敏
TANG Qing-Lin, LI Nian-Zu, SONG Ming, DING Ning, CHEN Zhu-Rui, LIU Zhi-Yu, WANG Zhi-Min
摘要: 为阐明芥菜开花路径核心调节子SVP与FLC相互作用的结构域,从酵母重组质粒pGADT7SVP、pGBKT7FLC分别亚克隆了5个SVP截短体(SVP1 ~ 5)和5个FLC截短体(FLC1 ~ 5)。SVP1 ~ 5与FLC1 ~5编码蛋白的结构域均分别为MI、MIK、K、IKC和KC。利用酵母双杂交体系,分别构建酵母猎物质粒pGADT7SVP1 ~ 5与诱饵质粒pGBKT7FLC1 ~ 5,并转化对应的酵母Y187、Y2HGold菌。酵母转化子Y187[pGADT7SVP2 ~ 5]能与Y2HGold[pGBKT7FLC]融合,并可在选择性固体培养基QDO/X/A上长出蓝色菌落,表明FLC能与截短体蛋白SVP2 ~ 5异源结合,SVP的K域(SVP3)可独立作用于FLC蛋白。此外,Y187[pGADT7SVP]× Y2HGold[pGBKT7FLC2 ~ 5]也能同时激活报告基因AUR1-C、HIS3、ADE2、MEL1,表明FLC的K域(FLC3)也可独立作用于SVP。进一步研究发现:Y187[pGADT7SVP3]× Y2HGold[pGBKT7FLC3]正向杂交以及Y187[pGADT7FLC3]× Y2HGold[pGBKT7SVP3]载体互换后杂交均可相互作用,表明SVP的K域(SVP第96 ~ 173位氨基酸区域)与FLC的K域(FLC第114 ~ 167位氨基酸区域)能够异源结合,是介导SVP与FLC蛋白互作的关键结构域。
中图分类号: