霜霉病菌侵染的黄瓜叶片cDNA文库的构建及抗病相关基因筛选

园艺学报 ›› 2010, Vol. 37 ›› Issue (11): 1775-1782.

霜霉病菌侵染的黄瓜叶片cDNA文库的构建及抗病相关基因筛选

王丽娟1，牛德1，孙彩玉1，秦智伟2 ,*

（1东北农业大学生命科学学院，哈尔滨 150030；2东北农业大学园艺学院，哈尔滨 150030）

收稿日期:2010-06-22 修回日期:2010-10-18 出版日期:2010-11-25 发布日期:2010-11-25
通讯作者: 秦智伟

Construction of cDNA Library from Cucumber Leaves Infection by Pseudoperonospora cubensis and Screening of Resistance-related Genes

WANG Li-juan1，NIU De1，SUN Cai-yu1，and QIN Zhi-wei2,*

（1College of Life Science，Northeast Agricultural University，Harbin 150030，China；2College of Horticulture，Northeast Agricultural University，Harbin 150030，China）

Received:2010-06-22 Revised:2010-10-18 Online:2010-11-25 Published:2010-11-25
Contact: QIN Zhi-wei

摘要/Abstract

摘要： 以接种黄瓜霜霉病菌的抗病黄瓜品种‘649’的叶片为材料，使用改良SDS法提取总RNA，构建黄瓜叶片全长cDNA文库，得到的原始文库滴度为5.5 × 106 pfu • mL-1，扩增后的文库滴度达6.5 × 109 pfu • mL-1，重组率约为99%，插入片段在0.5 ~ 2.0 kb之间，大多在1.0 kb左右。随机选取3 360个克隆进行测序，共拼接出2 507个unigenes，其中包括211个重叠群（Contigs）和2 296个单拷贝EST（Singlets）。生物信息学分析显示：这些unigenes中存在427条与植物防御/抗病相关的基因，其中包括两类抗病基因和细胞程序性死亡相关基因，这些基因的发现为下一步研究黄瓜抗病机理，克隆抗霜霉病相关基因提供了重要的参考。

关键词: 黄瓜, 霜霉菌, RNA提取, cDNA文库, 抗病相关基因

Abstract: Total RNA was extracted from the leaves of the disease-resistant cucumber（Cucumis sativus L.）cultivar‘649’challenged by Pseudoperonospora cubensis using the modified SDS method. And then，a full-length cDNA library was constructed. The results showed that the primary titer of the constructed cDNA library was 5.5 × 106 pfu • mL-1，and titer of the amplified library was 6.5 × 109 pfu • mL-1. The recombination rate was about 99%. The size of inserted cDNA fragment ranged from 0.5 kb to 2.0 kb，majority at about 1.0 kb. Sequencing analysis showed that 2 507 unigenes，included 211 contigs and 2 296 singlets were identified in the 3 360 ESTs derived from the cDNA library. The result of the bioinformatics analysis indicated that there were 427 plant defense/resistance-related genes including two type resistance genes and programmed cell death related genes. The discovery of these genes provides an important reference for further studying cucumber disease resistance mechanism and cloning resistance related genes.

Key words: cucumber, Pseudoperonospora cubensis, RNA extraction, cDNA Library, resistance related genes

中图分类号:

S 642.2

王丽娟;牛德;孙彩玉;秦智伟;. 霜霉病菌侵染的黄瓜叶片cDNA文库的构建及抗病相关基因筛选[J]. 园艺学报, 2010, 37(11): 1775-1782.

WANG Li-juan;NIU De;SUN Cai-yu;and QIN Zhi-wei;. Construction of cDNA Library from Cucumber Leaves Infection by Pseudoperonospora cubensis and Screening of Resistance-related Genes [J]. ACTA HORTICULTURAE SINICA, 2010, 37(11): 1775-1782.

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