辣椒脉斑驳病毒CP基因的原核表达及其抗血清的制备

园艺学报 ›› 2010, Vol. 37 ›› Issue (10): 1598-1604.

辣椒脉斑驳病毒CP基因的原核表达及其抗血清的制备

吴育鹏1,2，王健华1,2，冯团诚1，张雨良1，王小明1,2，刘志昕1,*

（1中国热带农业科学院热带生物技术研究所，农业部热带作物生物技术重点开放实验室，海口 571101；2海南大学环境与植物保护学院，海南儋州 570228）

收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2010-10-25 发布日期:2010-10-25
通讯作者: 刘志昕

Expression of Chilli veinal mottle virus Coat Protein and Preparation of a Virus-specific Antiserum

WU Yu-peng1,2，WANG Jian-hua1,2，FENG Tuan-cheng1，ZHANG Yu-liang1，WANG Xiao-ming1,2，and LIU Zhi-xin1,*

（1Key Laboratory of Tropical Crop Biotechnology of Ministry of Agriculture，Institute of Tropical Bioscience and Biotechnology，Chinese Academy of Tropical Agricultural Sciences，Haikou 571101，China；2College of Environment and Plant Protection，Hainan University，Danzhou，Hainan 570228，China）

Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:2010-10-25 Published:2010-10-25
Contact: LIU Zhi-xin

摘要/Abstract

摘要： 采用RT-PCR方法克隆了辣椒脉斑驳病毒文昌分离物（ChiVMV-WC）的CP基因，并将其连接到原核表达载体pET-30b（+）上，克隆测序以确定其阅读编码框的正确性，然后将获得的重组质粒pET30b-ChiVMV CP转化大肠杆菌Rosetta（DE3）后，用IPTG进行诱导表达。SDS-PAGE分析结果表明，CP基因在大肠杆菌中获得了高效表达，获得的融合蛋白分子量约为38 kD。用Ni2+-NTA 琼脂糖亲和层析纯化的融合蛋白免疫兔子并获得抗血清。Western blot检测结果表明，抗血清与诱导表达的ChiVMV-WC编码CP蛋白发生特异性反应。间接酶联免疫吸附法（ID-ELISA）检测抗血清效价为1/106。通过对田间20个样品的ID-ELISA检测，证实了所制备的抗血清与ChiVMV病叶具有良好的反应特异性。

关键词: 辣椒, 辣椒脉斑驳病毒, 外壳蛋白, 原核表达, 抗血清

Abstract: The coat protein（CP）gene of Chilli veinal mottle virus Wenchang isolate（ChiVMV-WC）was amplified by RT-PCR，and cloned into the expression vectors pET-30b（+）. After the reading frame is confirmed by sequencing, the recombinant plasmid pET30b-ChiVMV CP was transferred into E. coli Rosetta（DE3）and the expression of the recombinant CP protein was then induced by IPTG. SDS-PAGE analysis showed a high level expression of the recombinant CP of about 38 kD. The fusion protein was then purified with Ni2+-NTA agarose affinity chromatography, and used to immune rabbits for antiserum preparation. Western blot analysis confirmed that the antiserum reacted strongly and specifically to the CP of ChiVMV-WC. The optimal titer of the antiserum in indirect enzyme-linked immunosorbent assay （ID-ELISA）was determined to be 1/106. ID-ELISA testing of a number of field samples demonstrated the sensitivity and specificity of the antiserum described in this paper.

Key words: pepper, Chilli veina mottle virus, CP, prokaryotic expression, antiserum

中图分类号:

S 641.3

吴育鹏;王健华;冯团诚;张雨良;王小明;刘志昕;. 辣椒脉斑驳病毒CP基因的原核表达及其抗血清的制备[J]. 园艺学报, 2010, 37(10): 1598-1604.

WU Yu-peng;WANG Jian-hua;FENG Tuan-cheng;ZHANG Yu-liang;WANG Xiao-ming;and LIU Zhi-xin;. Expression of Chilli veinal mottle virus Coat Protein and Preparation of a Virus-specific Antiserum[J]. ACTA HORTICULTURAE SINICA, 2010, 37(10): 1598-1604.

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