柿果实扩张蛋白基因cDNA克隆及原核表达

园艺学报 ›› 2010, Vol. 37 ›› Issue (7): 1139-1146.

柿果实扩张蛋白基因cDNA克隆及原核表达

常晓晓，饶景萍*，刘乐

（西北农林科技大学园艺学院，陕西杨凌 712100）

收稿日期:2010-03-12 修回日期:2010-05-19 出版日期:2010-07-25 发布日期:2010-07-25
通讯作者: 饶景萍

Cloning and Prokaryotic Expression of Expansin cDNA in Persimmon Fruits

CHANG Xiao-xiao，RAO Jing-ping*，and LIU Le

（College of Horticulture，Northwest A & F University，Yangling，Shaanxi 712100，China）

Received:2010-03-12 Revised:2010-05-19 Online:2010-07-25 Published:2010-07-25
Contact: RAO Jing-ping

摘要/Abstract

摘要： 以‘富平尖柿’（Diospyros kaki L.‘Fuping Jianshi’）果实不同发育时期提取的总RNA为模板，利用RT-PCR结合RACE技术扩增得到5个扩张蛋白基因：成熟期CDK-Exp3（1 168 bp），转色期CDK-Exp4（1 120 bp）和CDK-Exp5（1 018 bp），膨大期CDK-Exp6（1 129 bp）和CDK-Exp7（1 121 bp）；5个基因的开放阅读框（ORF）均为765 bp，编码254个氨基酸；构建了CDK-Exp3原核表达载体pET-CDK-Exp3，并转化于E.coli BL21（DE3），SDS-PAGE检测结果显示表达了一个约43 kD的蛋白。

关键词: 柿, 果实, 扩张蛋白, 基因, cDNA克隆, 原核表达

Abstract: Using the total RNA from different stages of persimmon（Diospyros kaki L.‘Fuping Jianshi’）fruit as the template，five expansin cDNA：CDK-Exp3（1 168 bp）from mature stage，CDK-Exp4（1 120 bp）and CDK-Exp5（1 018 bp）from colour-changed stage，CDK-Exp6（1 129 bp）and CDK-Exp7（1 121 bp）from fruit expanding stage were isolated by RT-PCR and RACE. The open reading frame of the five genes was 765 bp and encoded a protein of 254 amino acid residues. The CDK-Exp3 was cloned into pET-32a（+）vector to construct recombination prokaryotic expression vector pET-CDK-Exp3，and which was transformed to E.coli BL21. Recombinant protein about 43 kD was expressed in pET-CDK-
Exp3 system and separated by SDS-PAGE electrophoresis.

Key words: persimmon, fruit, expansin, gene, cDNA clone, prokaryotic expression

中图分类号:

S 665.2

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