切花月季ACC合成酶基因的克隆和原核表达

园艺学报 ›› 2010, Vol. 37 ›› Issue (7): 1132-1138.

切花月季ACC合成酶基因的克隆和原核表达

谭远军1，薛璟祺2，仝征1，马男1，高俊平1,*

（1中国农业大学观赏园艺与园林系，北京100193；2中国农业科学院蔬菜花卉研究所，北京100081）

收稿日期:2010-06-15 修回日期:2010-06-22 出版日期:2010-07-25 发布日期:2010-07-25
通讯作者: 高俊平

Cloning and Recombinant Protein Expression of ACC Synthase Genes in Cut Roses（Rosa hybrida）

TAN Yuan-jun1，XUE Jing-qi2，TONG Zheng1，MA Nan1，and GAO Jun-ping1,*

（1Department of Ornamental Horticulture and Landscape Architecture，China Agricultural University，Beijing 100193，China；2Institute of Vegetables and Flowers，Chinese Academy of Agricultural Sciences，Beijing 100081，China）

Received:2010-06-15 Revised:2010-06-22 Online:2010-07-25 Published:2010-07-25
Contact: GAO Jun-ping

摘要/Abstract

摘要： 克隆了与伤害诱导相关的Rh-ACS1和与花朵开放进程及乙烯诱导相关的Rh-ACS3基因全长。结果表明，Rh-ACS1基因全长为2 132 bp，开放阅读框（ORF）长度为1 476 bp，推定编码491个氨基酸。Rh-ACS3基因的全长1 734 bp，ORF长度为1 545 bp，推定编码514个氨基酸。对这两个基因编码的蛋白进行原核表达分析，结果显示，在37 ℃条件下，0.6 mmol · L-1 IPTG诱导3 h后，携带Rh-ACS1 ORF和Rh-ACS3 ORF的原核表达载体分别在大肠杆菌中诱导生成了大量分子量约为70和60 kD的蛋白质，其大小与根据基因序列预测的理论值相一致。

关键词: 月季切花, ACS, 基因克隆, 原核表达

Abstract: Our previous work showed that the expression of ACC synthase genes was contributed to the effects of ethylene on hastening flower opening. In the present work，we isolated the wound-inducible and ethylene up-regulated ACS genes，namely Rh-ACS1 and Rh-ACS3，from cut rose petals. The full length of Rh-ACS1 is 2 132 bp，contains a 1 476 bp ORF which encodes a putative ACS protein with 491 aa，while the entire Rh-ACS3 is 1 734 bp in length，and contains a 1 545 bp ORF which encodes a putative ACS protein with 514 aa. The ORFs of Rh-ACS1 and Rh-ACS3 were inserted into pGEX-4T-1 and pET-30a to express the recombinant proteins in E.coli，respectively. The expression of predicted 70 kD and 60 kD recombinant proteins were induced by isopropyl β-D-thiogalacto-pyranoside（IPTG）at a final concentration of 0.6 mmol · L-1 for 3 h at 37 ℃.

Key words: cut rose, ACS, gene cloning, procaryotic expression

中图分类号:

S 685.12

谭远军;薛璟祺;仝征;马男;高俊平;. 切花月季ACC合成酶基因的克隆和原核表达[J]. 园艺学报, 2010, 37(7): 1132-1138.

TAN Yuan-jun;XUE Jing-qi;TONG Zheng;MA Nan;and GAO Jun-ping;. Cloning and Recombinant Protein Expression of ACC Synthase Genes in Cut Roses（Rosa hybrida） [J]. ACTA HORTICULTURAE SINICA, 2010, 37(7): 1132-1138.

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