龙眼14-3-3基因的克隆与原核表达

园艺学报 ›› 2009, Vol. 36 ›› Issue (10): 1431-1436.

龙眼14-3-3基因的克隆与原核表达

游向荣¹;王平²;梁文裕¹;郑少泉³;陈伟^1*

(¹福建农林大学生命科学学院, 福州350002; ² 福建农林大学园艺学院, 福州350002; 3 福建省农业科学院果树研究所, 福州350013)

收稿日期:2009-05-21 修回日期:2009-09-16 出版日期:2009-10-25 发布日期:2009-10-25
通讯作者: 陈伟

Cloning and Prokaryotic Expression of 14-3-3 Gene in Longan

YOU Xiang-rong¹;WANG Ping²;LIANGWen-yu¹;ZHENG Shao-quan³;CHEN Wei^1*

(¹College of Life Science, Fujian Agriculture and Forestry University, Fuzhou 350002, China; ²College of Horticulture, Fujian Agriculture and Forestry University, Fuzhou 350002, China; ³ Fruit Research Institute, Fujian Academy of Agriculture Sciences,Fuzhou 350013, China)

Received:2009-05-21 Revised:2009-09-16 Online:2009-10-25 Published:2009-10-25
Contact: CHEN Wei

摘要/Abstract

摘要： 以龙眼(Dimocarpus longan Lour. ) 为试材, 应用同源克隆和RACE方法从花芽中获得了调控
蛋白14-3-3的全长cDNA序列, GenBank登录号为FJ479618 (GI: 218202931) 。该cDNA全长1 121 bp, 包括一个783 bp的开放阅读框, 编码261个氨基酸, 序列比较分析显示14-3-3 cDNA具有较高的保守性。半定量RT-PCR分析结果表明, 14-3-3 mRNA在龙眼叶芽、叶片、花芽和成熟的花中都有表达, 但在花芽中表达量最大。构建了pET14-3-3原核表达系统, 将14-3-3全长cDNA在大肠杆菌中表达, 获得一个分子量约为34 kD的可溶性融合蛋白, 经Western blotting验证, 该蛋白为14-3-3蛋白。

关键词: 龙眼, 花芽, 142323基因, 克隆, 原核表达

Abstract: Full length cDNA of 14-3-3 gene, encoding a plant regulatory factor, was isolated from longan (Dimocarpus longan Lour. ) using homology based cloning and RACE methods. The accession number of the gene in GenBanks is FJ479618 (GI: 218202931). The full length cDNA is of 1 121 bp, with a 783 bp open reading frame encoding 261 amino acids. Homology analysis showed that the longan 14-3-3 cDNA has high consensus regions. Semi-quantitative RT-PCR analysis detected the exp ression of 14-3-3 gene in longan foliar
buds, leaves, mature flowers, and most up2regulated in flower buds. The p rokaryotic exp ression vector was-constructed and was expressed in E.coli; and a recombinant protein with a molecularweight of 34 kD was obtained by SDS-PAGE analysis. Western blotting confirmed the p rotein was 14-3-3 protein.

Key words: longan, flower bud, 14-3-3 gene, clone, prokaryotic expression

中图分类号:

S 667.2
Q 78

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